食品中防腐劑和甜味劑的高效液相色譜儀(HPLC)檢測(cè) 方案
食品加工工藝和防腐的需要，以及為了改善食品品質(zhì)和色、味、香，在食品生產(chǎn)加工過(guò)程中，食品中 通常會(huì)加入少量的天然或者化學(xué)合成的物質(zhì)。最近幾年，由于食品安全問(wèn)題層出不窮，人們?cè)絹?lái)越重視食 品添加劑所帶來(lái)的安全隱患。
以下是苯甲酸、山梨酸和安賽蜜、糖精鈉的詳細(xì)檢測(cè)方法。
1、儀器與試劑
1.1 儀器
LC-8600 高效液相色譜儀
Vertex 色譜柱 250mm×4.6mm×5μm； 超聲波水浴振蕩器；
食品粉碎機(jī)；
pH 計(jì)；
天平：分度值為 0.001 mg。
1.2 試劑
甲醇：色譜純
乙酸銨溶液：稱取 1.54 g 乙酸銨，加水溶解并稀釋至 1000 mL，經(jīng) 0.45μm 微孔濾膜過(guò)濾。 亞鐵氰化鉀溶液：稱取 106 g 亞鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6?3H2O]加水至 1000 mL。
乙酸鋅溶液：稱取 220g 乙酸鋅[Zn(CH3COO)2?2H20]溶于少量水中，加入 30mL 冰乙酸，加水稀釋至l000mL。
氨水(1+1)：氨水與水等體積混合。
2、色譜條件
色譜柱：Vertex C18 柱，250mm x 4.6 mm，5μm； 流動(dòng)相：甲醇+0.02mol/l 乙酸銨溶液(5:95)； 流速：1 mL／min；
進(jìn)樣量：20μL； 檢測(cè)波長(zhǎng) 230nm。
3、試樣溶液的制備
3.1 含脂肪、蛋白的樣品
稱取約 10g 左右樣品于燒杯中（固體樣品要用攪拌機(jī)攪碎），加入約 60ml 蒸餾水，再超聲波水浴振蕩10 分鐘，然后用轉(zhuǎn)移到 100ml 比色管中，并用少量水潤(rùn)洗干凈燒杯； 加入 5ml 亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入 5 mL 乙酸鋅溶液，搖勻； 根據(jù) PH 計(jì)讀數(shù)，用氨水調(diào)節(jié) PH 至接近中性；用水定容至 100ml 刻度，搖勻，用三角瓶,濾紙，玻璃棒，漏斗過(guò)濾； 吸取濾液約 1.5ml，用微孔濾膜過(guò)濾，濾液待上機(jī)分析。
3.2 不含脂肪、蛋白的樣品
稱取約 10g 左右樣品于燒杯中（固體樣品要用攪拌機(jī)攪碎），加入約 60ml 蒸餾水，再超聲波水浴振蕩10 分鐘，然后轉(zhuǎn)移到 100ml 比色管中，并用少量水潤(rùn)洗干凈燒杯； 根據(jù) PH 計(jì)讀數(shù)，用氨水調(diào)節(jié) PH 至接近中性；用水定容至 100ml 刻度，搖勻，用三角瓶,濾紙，玻璃棒，漏斗過(guò)濾； 吸取濾液約 1.5ml，用微孔濾膜過(guò)濾，濾液待上機(jī)分析。
注：1-安賽蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精鈉；混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
4、結(jié)果分析
4.1 儀器精密度的測(cè)定
取濃度為苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜濃度為 10.0ug/ml，平行測(cè)定 7 次。
表 1：精密度的測(cè)定結(jié)果
分析結(jié)果可以得出，每個(gè)組分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于 1％，表明儀器在選定條件下重現(xiàn)性好， 完全可以滿足分析測(cè)定的要求。
4.2 回收率的測(cè)定
分析結(jié)果的準(zhǔn)確度可以用回收率來(lái)衡量?；厥章试浇咏?/span> 100％，測(cè)得的結(jié)果越接近真值，即準(zhǔn)確度越好。 同時(shí)平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差可以表明方法的重現(xiàn)性。
取清涼茶、樣品分別進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，加入苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜濃度均為 10.00ug/ml 標(biāo) 準(zhǔn)溶液，平行測(cè)樣 7 次，進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 2。
表 2：清涼茶的加標(biāo)測(cè)定結(jié)果和回收率
從上表可以看出清涼茶的加標(biāo)測(cè)定的回收率：苯甲酸為 98.5%-103.4%，山梨酸為 98.3%-103.1%，糖 精鈉為 97.5%-104.3%,安賽蜜為 98.4%-103.3%。各組分的回收率都接近 100%，滿足日常檢測(cè)的要求。
儀器配置：LC-8600 高效液相色譜儀
